Sfaturi de bază pentru crioprezervarea culturilor celulare

Sfaturi de bază pentru crioprezervarea culturilor celulare

Celulele își continuă metabolismul în timpul activităților normale de creștere, ceea ce necesită participarea diferitelor proteaze. Când temperatura scade sub -70 ° C, proteazele nu mai funcționează. Prin urmare, într-un mediu cu temperaturi extrem de scăzute, celulele își pot opri activitățile metabolice și pot intra într-o stare latentă care permite stocarea pe termen lung.

1. Materiale experimentale

Material de baza:

Mediu de cultură de bază

Ser (FBS/NB -uri convenționale)

Bancă de lucru ultrapură

Sulfoxid de dimetil steril (DMSO)

Soluție de sare tampon cu fosfat PBS steril

Pipetting Gun

Pistol de pipet electric

Pregătirea experimentelor

a) Pregătirea soluției de îngheț:

Celule generale: 55% mediu bazal + 40% ser bovin (FBS/NBS) + 5% DMSO

Celule vitale: 90% ser bovin (FBS/NBS) + 10% DMSO

ALIQUOT Soluția de crioprezervare preparată într -un tub de centrifugă de 15 ml [Nest] și se păstrează la 4 ° C pentru utilizare ulterioară.

(b) Pregătirea celulelor care trebuie înghețate:

Înainte de înghețarea celulelor, selectați celulele cu statut de creștere bun și în faza de creștere logaritmică și înlocuiți-le cu mediu proaspăt cu 12-24 ore înainte de îngheț pentru a menține starea celulară.

2. Procedură experimentală

1. Observați densitatea celulelor pentru a fi înghețată, care este de aproximativ 80%~ 90%. Folosiți o armă de pipetă pentru a aspira mediul vechi, adăugați PBS steril pentru a spăla celulele de 1-2 ori și îndepărtați mediul rămas în mediul culturii.

2. Adăugați o cantitate adecvată de trypsină sau suc digestiv pentru a permite trypsinei să intre în celule și să le plasați în incubator pentru digestie. Observați starea celulelor sub microscop: citoplasma se retrage și celulele nu mai sunt conectate în foi. În acest moment, adăugați soluția de oprire pentru a opri procesul de digestie.

3. Bublați ușor celulele cu un vârf pentru a forma o suspensie celulară și centrifuge suspensia celulei la 1000 rpm timp de 3-5 minute.

Renunțați la supernatant, adăugați o cantitate adecvată de soluție de îngheț și pipetați ușor pentru a face celulele să conteze uniform. Reglați densitatea celulei cu mediu de crioprezervare pentru a face densitatea finală 5 × 106/ml ~ 1 × 107/ml.

4. Folosiți o armă de pipetă pentru a separa tuburile criogene în funcție de capacitatea preconizată și utilizați o mașină de captare automată pentru a se captura și sigilare.

5. Programul standard de crioprezervare este o rată de răcire de la -1 ° C până la -2 ° C/min, iar celulele care trebuie înghețate pot fi înghețate treptat în funcție de următorii pași: Temperatura camerei → 4 ° C (20min) → - 20 ° C (30min) → -80 ° C ° C (peste noapte) → depozitare pe termen lung în azot lichid.

De asemenea, poate fi depozitat direct într -un congelator la -80 ° C peste noapte și apoi transferat la azot lichid pentru depozitare.

Yongyue Medical este o întreprindere de înaltă tehnologie specializată în cercetare și dezvoltare, producție și vânzări de consumabile biomedicale. Sfaturi de pipetă, pipete, placă PCR, produse de cultură celulară și alte consumabile de laborator biologic. Yongyue Medical este demn de încrederea și alegerea ta! Bine ați venit la consult!