Probleme de sigilare și contaminare în plăcile de cultură a celulelor multiwell

Încărcarea și manipularea plăcilor de cultură cu mai multe godeuri:

Placa de cultură a celulelor urmărește, de asemenea, principiul ASEPSISULUI strict atunci când efectuează operații celulare. Toate operațiunile trebuie să fie standardizate și științifice și nu vor provoca un impact suplimentar asupra creșterii celulelor. Cea mai frecventă problemă este modul de a asigura uniformitatea celulelor după adăugarea eșantionului și a minimiza impactul schimbării mediului asupra stării de creștere a celulelor.

cere:
Capacele plăcilor de cultură cu 96 și 24 de godeuri sau vasele Petri sunt foarte libere, ceea ce este convenabil pentru ventilație, dar vor aluneca și bacteriile, mucegaiul și alți poluanți?

Răspuns:
Capacul este foarte liber, ceea ce aparține culturii semi-deschise, iar scopul acestui lucru este să se ventileze (de fapt, este de a face CO2 în afara vasului de cultură să se schimbe pe deplin cu vasul de cultură și să menținem valoarea pH-ului culturii mediu).
Totul are avantaje și dezavantaje, ceea ce, desigur, crește posibilitatea poluării. În plus, acest lucru face ca lichidul din vas să se evapore, ceea ce este remarcabil pentru dozarea precisă a medicamentelor. Prin urmare, sunt necesare următoarele două măsuri: a. Aerul din incubator trebuie să fie curat (lumina ultravioletă obișnuită, spălarea alcoolului și incubatorul trebuie deschis și închis cât mai puțin) b. Umiditatea incubatorului trebuie să fie întotdeauna păstrată la 100% (chiuveta cu apă distilată sterilă plasată în incubator).
La fel ca un vas Petri, este, de asemenea, un recipient cu capac cu susul în jos și nu va fi poluat. În principal din cauza presiunii negative a fluxului de aer generat de marginea „L” a capacului, există microorganisme atașate la praf, iar praful purtat de fluxul de aer nu poate trece prin marginea capacului care generează presiune negativă. Efectul de ventilație este doar prin difuzarea aerului și nu va fi generat niciun flux de aer, astfel încât acesta va respira doar și nu va pătrunde bacteriile.

cere:
Folosind o placă cu 24 de godeuri, există operații în unele dintre puțuri (în banca ultra-curățată) și există celule care trebuie cultivate în alte puțuri. Sunt îngrijorat că acest lucru va provoca contaminare. Nu știu la ce să fiu atent?

Răspuns:
Dacă operația este standardizată pe banca ultra-curățată, ar trebui să fie OK. Cred că puteți folosi pe deplin coperta plăcii de cultură, încercați să expuneți doar găurile care trebuie operate și să acoperiți celelalte găuri cu copertine.
Luați în considerare în mod cuprinzător înainte de utilizare și utilizați pe deplin toate găurile; Dacă trebuie să utilizați doar câteva găuri, puteți utiliza o singură parte și puteți acoperi restul cu un capac. Sunt obișnuit să folosesc mai întâi gaura din dreapta (este convenabil să adaug probe la mâna dreaptă).

Când funcționați, utilizați câteva diapozitive de sticlă pentru a ridica o parte a plăcii, nu deschideți capacul complet, în general, nicio problemă.
Distribuție și soluții inegale ale celulelor

cere:
Celulele sunt inoculate pe placa de cultură, iar celulele se adună întotdeauna în partea periferică, cum să se ocupe de ea?

Răspuns:
Pot să vă întreb cum sunt amestecate celulele dvs.? Se pipetează sau se agită placa de cultură? Dacă este cel din urmă și, dacă este zguduit într -un cerc, este foarte probabil ca celulele să fie aruncate în partea periferică din cauza forței centrifuge, rezultând mai puține celule la mijloc. Mai mult de patru săptămâni!
Iată o modalitate bună: înainte de a cultiva placa de semințe, puneți placa de cultură în incubator pentru câteva ore de saturație și apoi scoateți -o. Forța ar trebui să fie ușoară atunci când plantați celulele. Adăugarea lent permite ca suspensia celulară să curgă în puțurile plăcii, iar celulele cultivate cresc în mod uniform. Nu uitați să nu vă agitați niciodată cu un agitator, sau celulele dvs. se vor aglomera împreună așa cum ați spus.
Cu cât diametrul găurii este mai mic al plăcii de cultură, cu atât este mai evident acest fenomen. Acest fenomen este inevitabil pentru plăci cu 24 și 96 de godeuri, deoarece lichidul aderă la perete, astfel încât soluția de cultură din puț să nu formeze un nivel lichid, dar periferia este ridicată, la fel ca o oglindă concavă. Cu toate acestea, atunci când utilizați aceste două tipuri de plăci de orificiu, nu este posibilă adăugarea unei cantități suficiente de soluție de cultură datorită necesității unei intervenții suplimentare, astfel încât celulele să apară „colecția de margine” împreună cu soluția de cultură. Depinde de indicatorii pe care trebuie să -i observați. Dacă este MTT, imunohistochimia va afecta rezultatele datorate stratului de celule.
Atunci când digerați celulele, acordați atenție pipetului uniform pentru a evita aglomerările de celule, iar cantitatea de soluție de cultură din puț ar trebui să fie suficientă. În general, adăugați suficientă soluție de cultură la inoculare și schimbați soluția o dată când adăugați intervenție. Cantitatea de soluție de cultură adăugată la soluția de intervenție este egală cu cantitatea de soluție de cultură la momentul inoculării, în acest caz, fenomenul „setului de margine” va fi îmbunătățit, astfel încât să încercați la fel de bine.

cere:
Ceea ce am făcut a fost experimentul de formare a plăcii. Cel mai bine este să răspândiți celulele într -un strat uniform. Majoritatea găurilor sunt în regulă atunci când virusul este inoculat, iar unele dintre ele nu sunt uniforme. Există mari diferențe în grupul celular. Aș dori să vă întreb ce metodă utilizați atunci când adăugați celule?

Răspuns:
Este esențial să pipetezi celulele într-o suspensie cu o singură celulă după digestie! Asigurați -vă că numărul de celule din fiecare fântână este consecvent atunci când împărțiți placa!
Desigur, există și factori de procesare. Paralelismul dintre puțuri este, de asemenea, foarte important. De exemplu, atunci când adăugați medicament, amestecați medicamentul după diluare pentru a vă asigura că concentrația fiecărui puț este consistentă!
Mai mult, atunci când adăugați celule și medicamente, grupul de testare și grupul de control ar trebui să fie adăugat la rândul său pentru a evita diferența de densitate a celulelor și concentrația de medicamente cauzate de secvența de adăugare a probelor!

cere:
Suflarea este deja uniformă, dar scândura, 6 găuri și 24 de găuri sunt întotdeauna oarecum inegale și puțin concentrate la mijloc. Mai mult decât atât, este evident că numărarea se face, iar după o zi sau două, densitatea fiecărei găuri este diferită, ceea ce va afecta detectarea. Există o modalitate bună?

Răspuns:
Dacă utilizați o pipetă Pasteur, nu sugeți prea mult de fiecare dată, deoarece celulele din pipetă se vor scufunda automat, adesea numărul de celule din primele găuri este mare, iar suspensia celulelor este adesea uniformă, iar lichidul va Urmați traseul în formă S.
Dacă utilizați o pipetă, vârfurile trebuie procesate și eliminate pentru a evita deteriorarea celulelor, astfel încât de fiecare dată când lichidul este luat să corespundă unui puț. Este mai precis să adăugați o gaură unu la unu cu vârf. Dar, de asemenea, acordați atenție amestecării suspensiei.

Pentru a configura un grup paralel, n trebuie să fie suficient de mare (îl puteți calcula).

Nu se agită după placare, deoarece agitarea va determina celulele să se agregă spre centru. Cel mai bine este să scandat o dată.

Placă de cultură a celulelor poroase Yongyue Medical a considerat întotdeauna controlul calității drept viața întreprinderii și a urmărit îmbunătățirea continuă a competitivității întreprinderii. Compania respectă întotdeauna spiritul întreprinderii de a se supune legilor și reglementărilor, fiind strictă cu autodisciplina, fiind îndelungată și îndrăzneață să-și asume responsabilitatea ca standard în funcționare, menținerea și extinderea pieței cu o calitate excelentă și un serviciu excelent și îndeplinirea celor nevoile clienților în cea mai mare măsură. . Câștigarea cu clienții este obiectivul nostru de dezvoltare. Yongyue Medical! Partenerul tău de încredere. Suntem dispuși să cooperăm sincer cu tine pentru a crea un viitor mai bun.